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Abcam細(xì)胞培養(yǎng)制備

 更新時(shí)間:2024-11-27    點(diǎn)擊量:272

一、制備細(xì)胞生長培養(yǎng)基

所使用的培養(yǎng)基將取決于所使用的細(xì)胞類型。例如:

Abcam細(xì)胞培養(yǎng)制備

使用無菌技術(shù)在II級安全帽下工作。

二、在顯微鏡下檢查細(xì)胞

在生長過程中,應(yīng)該每天檢查細(xì)胞,以確保它們健康并按預(yù)期生長。它們應(yīng)該主要附著在燒瓶的底部,形狀圓而豐滿或細(xì)長,并在其膜周圍折射光線。這表明他們是健康的。

介質(zhì)應(yīng)該是粉橙色。如果細(xì)胞大量分離和/或看起來干癟和顆粒狀/顏色深,則丟棄細(xì)胞,不要用于檢測。

三、制備細(xì)胞懸浮液

1. 所有細(xì)胞處理和培養(yǎng)基制備應(yīng)在II類安全柜中使用無菌技術(shù)進(jìn)行。

2. 當(dāng)細(xì)胞融合70-80%時(shí),它們?nèi)詰?yīng)處于生長的對數(shù)階段,可用于電鍍。

3. 首先將培養(yǎng)基在37°C水浴中加熱至少30分鐘。

4. 準(zhǔn)備好后,小心地從一個(gè)175平方厘米的培養(yǎng)皿中倒入所需細(xì)胞的培養(yǎng)基(含有實(shí)驗(yàn)室消毒劑),注意不要增加任何滴入的污染風(fēng)險(xiǎn)。

5. 立即更換,小心地倒入100毫升預(yù)熱好的新鮮培養(yǎng)基。

6. 使用細(xì)胞刮板,輕輕刮掉燒瓶底部的細(xì)胞到培養(yǎng)基中。有些細(xì)胞系可能需要胰蛋白酶化。在繼續(xù)之前,檢查燒瓶底部,檢查所有的細(xì)胞是否脫落。

7. 確保待計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液通過輕搖瓶混合均勻。必要時(shí)可使用血清學(xué)移液管。

8. 在細(xì)胞wan機(jī)會(huì)沉淀之前,使用血清學(xué)移液管取出約1ml細(xì)胞懸液,并將其放置在附注管中。

9. 用血細(xì)胞計(jì)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

四、獲得正確的細(xì)胞密度

使用下面的計(jì)算得到正確的細(xì)胞密度。這應(yīng)該是4.5 × 105個(gè)細(xì)胞/mL左右,但需要根據(jù)細(xì)胞系進(jìn)行優(yōu)化。

N = df

45 × 104

N是每毫升細(xì)胞數(shù)

DF是計(jì)算出來的稀釋系數(shù)

由于細(xì)胞在100ml培養(yǎng)基中,接下來的計(jì)算是:

100 mL x稀釋因子

這將給出細(xì)胞應(yīng)該在的介質(zhì)體積的值。

用血清學(xué)移液管加入適量的預(yù)熱培養(yǎng)基。

例子:

如果細(xì)胞計(jì)數(shù)為55 × 104/mL,有100 mL細(xì)胞懸液:

55 × 104細(xì)胞/mL = 1.22

45 × 104細(xì)胞/mL

100毫升× 1.22 = 122毫升

因此,對于45 × 104/mL的細(xì)胞懸浮液,在100 mL細(xì)胞懸浮液中加入22 mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

如果正確細(xì)胞密度所需的體積小于100ml

將細(xì)胞倒入50ml離心管中。

在離心機(jī)中以100轉(zhuǎn)/分旋轉(zhuǎn)10分鐘,確保離心機(jī)平衡。

小心地倒出上清。

將細(xì)胞顆粒重懸于所需體積的預(yù)熱培養(yǎng)基中。


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Abcam 致力于鑒別、開發(fā)和提供高質(zhì)量的生物試劑和工具,這些試劑和工具在藥物發(fā)現(xiàn)、診斷和基礎(chǔ)研究等多個(gè)領(lǐng)域和應(yīng)用中起著至關(guān)重要的作用。

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Abcam抗體特色產(chǎn)品列表:

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品簡介

RabMAb®,兔單克隆抗體

Abcam致力于為您提供最you質(zhì)的抗體。AbcamRabMAb® 兔單抗 結(jié)合了單抗的特異性,為兔免疫系統(tǒng)提供了出色的抗原識(shí)別能力。

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Alexa Fluor® 偶聯(lián)一抗

蛋白質(zhì)很少孤立地發(fā)揮作用。相反,它們通常在多亞基化合物中發(fā)揮作用。因此,要想了解蛋白質(zhì)的功能,準(zhǔn)確掌握治療進(jìn)展,必須在多組分狀態(tài)下靶向蛋白質(zhì)。

如果沒有合適的工具,蛋白質(zhì)分析將會(huì)極其困難,并且得出錯(cuò)誤的結(jié)果。如果同時(shí)使用一抗和二抗(間接檢測),會(huì)出現(xiàn)物種間交叉反應(yīng);尋找適當(dāng)標(biāo)記的偶聯(lián)一抗也可能存在挑戰(zhàn)(直接檢測)。為了克服這些問題,Abcam獨(dú)jia推出了一系列帶有多種不同熒光標(biāo)記的偶聯(lián)抗體產(chǎn)品。


Abcam細(xì)胞培養(yǎng)制備




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