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Toxin腸毒素的用途——作為超抗原

 更新時間:2024-11-27    點擊量:297

原理:葡萄球菌腸毒素屬于超抗原,能夠非特異性激活T細胞增殖并釋放過量細胞因子,可用于抗腫瘤治療。T細胞活化通過暴露于特定抗原(例如葡萄球菌腸毒素 B (SEB))來測定。SEB是一種細菌毒素,能夠與抗原呈遞細胞 (APC) TCR上的MHCII類分子結(jié)合,誘導(dǎo)促炎細胞因子的釋放,例如IL-2、IL-6、TNF-αIFN-γ

 

應(yīng)用舉例:誘導(dǎo)活化T細胞

一、將 PBMCs120 K/孔)與 Nuclight 綠色試劑標(biāo)記的 Ramos 細胞(40 /孔)進行共培養(yǎng)。使用 CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE 抗體或葡萄球菌腸毒素 B (SEB) 誘導(dǎo)活化。在 60 h 時,使用 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導(dǎo)的細胞殺傷分析試劑盒和 T 細胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合 iQue® 3 系統(tǒng)分析 10 µL 樣本。

每種活化因子會導(dǎo)致不同的 CD3+ T 細胞蛋白表達和殺傷特征:

1.CD3/CD28 Dynabead 誘導(dǎo)的 T 細胞活化呈現(xiàn)濃度依賴的特性。最高的微球數(shù)量對應(yīng)于最大的活化標(biāo)志物表達百分比。該結(jié)果與高水平的細胞耗竭標(biāo)志物呈現(xiàn)相關(guān)性。

2.Dynabead SEB 相比,CD3×CD19 BiTE 抗體介導(dǎo)的靶細胞死亡增量最多,活化和耗竭水平顯著降低。這說明 BiTE 介導(dǎo)的免疫細胞殺傷時間可能持續(xù)的較長。

3.SEB 刺激,即使在zui濃度下,也可使 T 細胞活化并產(chǎn)生最大殺傷率,導(dǎo)致高水平的 T 細胞耗竭。

原理:葡萄球菌腸毒素屬于超抗原,能夠非特異性激活T細胞增殖并釋放過量細胞因子,可用于抗腫瘤治療。T細胞活化通過暴露于特定抗原(例如葡萄球菌腸毒素 B (SEB))來測定。SEB是一種細菌毒素,能夠與抗原呈遞細胞 (APC) TCR上的MHCII類分子結(jié)合,誘導(dǎo)促炎細胞因子的釋放,例如IL-2、IL-6、TNF-αIFN-γ。

 

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二、使用來自 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導(dǎo)的細胞殺傷分析試劑盒和 T 細胞耗竭分析試劑盒的 Qbeads 測定 Nuclight 綠色標(biāo)記的 Ramos PBMC3:1 比例)共培養(yǎng)時細胞因子的釋放數(shù)據(jù)。在多個試劑盒中均檢測了 IFN? TNFa 的濃度,以便將所有試劑盒的測定結(jié)果取平均值。

各個活化因子對細胞因子分泌和對表面蛋白表達的影響相當(dāng):

1.在使用的微球數(shù)量范圍內(nèi),CD3/CD28 Dynabead 誘導(dǎo)的細胞因子釋放呈濃度依賴性增加。

2.與微球或 SEB 相比,CD3×CD19 BiTE 刺激后的細胞因子釋放始終較低(最高刺激濃度下的顆粒酶 B 濃度除外)。該結(jié)果表明,在降低毒性風(fēng)險的情況下(例如細胞因子釋放綜合征),可以實現(xiàn)高水平的細胞殺傷。

3.SEB 可誘導(dǎo)高水平的細胞因子釋放(即使在低濃度下)。

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三、將 PBMCs25 K/孔)與貼壁 AU565 細胞(5 K/孔)進行共培養(yǎng)。使用 SEB 誘導(dǎo) T 細胞活化。在 60 h 時,使用 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導(dǎo)的細胞殺傷和 T 細胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合 iQue® 3 系統(tǒng)提取靶細胞和效應(yīng)細胞,進行終點分析。

SEB 活化誘導(dǎo)靶細胞殺傷呈濃度依賴性增加,伴隨 CD3+ T 細胞上活化(CD69、CD25 HLA-DR)和耗竭(PD-1、LAG-3 TIM-3)標(biāo)志物的高表達(在所有使用的 SEB 濃度中均是如此)。

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其他應(yīng)用:抗體制備、毒素檢驗、多種免疫和偶聯(lián)試驗、藥物研發(fā)等。

 

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