產(chǎn)品名稱：Elabscience大鼠VEGF-A ELISA試劑盒(E-EL-R2603)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號：E-EL-R2603

產(chǎn)品品牌：Elabscience

產(chǎn)品用途：該試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中VEGF-A濃度。

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。用抗大鼠 VEGF-A 抗體包被于酶標(biāo)板上，實驗時樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）中的大鼠 VEGF-A 會與包被抗體結(jié)合。后依次加入生物素化的抗大鼠 VEGF-A 抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，抗大鼠 VEGF-A 抗體與結(jié)合在包被抗體上的大鼠 VEGF-A 結(jié)合，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長處測 OD 值，VEGF-A 濃度與 OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中 VEGF-A 的濃度。

注意事項：

試劑盒注意事項：

1) 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷。

2) 試驗中請穿著實驗服并戴乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液樣品時，請按國家生物試驗室安全防護條例執(zhí)行。

3) 剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。暫時不用的板條應(yīng)拆卸后放入備用鋁箔袋，按照上述表格中保存條件存放。

4) 請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液。未用完的濃縮生物素化抗體(100×)、濃縮HRP酶結(jié)合物(100×)、酶標(biāo)板及其他原液按照上述表格中保存條件存放。

5) 檢測使用的酶標(biāo)儀需要安裝能檢測450±2 nm波長的濾光片，光密度范圍在0-3.5之間。建議使用時提前15分鐘預(yù)熱。

6) 請勿使用其他批號或其他來源的試劑混合或替代本試劑盒中的試劑。

7) 試驗中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁混用。

8) 請勿使用過期的試劑。n

樣品注意事項：

1) 收集血液的試管應(yīng)為一次性無內(nèi)毒素試管。避免使用溶血，高血脂樣品。

2) 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測可保存于2-8℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃(3個月內(nèi)檢測)，避免反復(fù)凍融。在檢測前，冷凍過的樣本應(yīng)緩慢地融化并離心除去凍融過程產(chǎn)生的沉淀物。室溫混勻后使用。

3) 試劑盒檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍。如果樣品中待測物濃度過高或過低，請對樣本做適當(dāng)?shù)南♂尰驖饪s。

4) 若所檢樣本不在說明書所列樣本之中，建議做預(yù)實驗驗證其檢測有效性。

5) 若使用化學(xué)裂解液制備組織勻漿或細(xì)胞提取液，由于引入某些化學(xué)物質(zhì)會導(dǎo)致ELISA測值出現(xiàn)偏差。

6) 某些重組蛋白可能與試劑盒中捕獲或檢測抗體不匹配而出現(xiàn)不能檢測的情況。

操作步驟：

1. 分別設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔和樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)孔加入 100 μL倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔加入 100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品&樣本稀釋液，其余孔加入 100 μL 待測樣本(建議所有的待檢樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在檢測中設(shè)立復(fù)孔；建議通過預(yù)實驗或咨詢技術(shù)支持確定待檢樣本的稀釋倍數(shù))。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育 90 分鐘。提示：加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，避免產(chǎn)生氣泡。加樣時間宜控制在 10 分鐘內(nèi)。

2. 甩盡孔內(nèi)液體，不用洗滌。每個孔中加入生物素化抗體工作液 100 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育 1 小時。

3. 甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干。每孔加洗滌液 350 μL，浸泡 1 分鐘，吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，拍干。重復(fù)此洗板步驟 3 次。提示：此處與其他洗板步驟都可使用洗板機(參考北京拓普 DEM-3 型洗板機參數(shù)設(shè)置：2 點吸，每孔加入洗滌液 350 μL，振板 5 秒，吸液 0.5 秒)。洗板完成后請立即進行下步操作，不要讓微孔板干燥。

4. 每孔加 HRP 酶結(jié)合物工作液 100 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育 30 分鐘。

5. 甩盡孔內(nèi)液體，洗板 5 次，方法同步驟 3。

6. 每孔加底物溶液(TMB)90 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃避光孵育 15 分鐘左右。提示：根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過 30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(前 4 個顯色孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度)，即可終止。提前 15 分鐘打開酶標(biāo)儀預(yù)熱。

7. 每孔加終止液 50 μL，終止反應(yīng)。提示：終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。

8. 立即用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長測量各孔的光密度(OD值)。

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