產(chǎn)品名稱：索萊寶Solarbio小鼠骨髓淋巴細(xì)胞分離液試劑盒(P6040)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號(hào)：P6040

產(chǎn)品品牌：索萊寶

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品組成:

實(shí)驗(yàn)流程：

淋巴細(xì)胞分離方法（僅供參考）

1. 制備脾臟的單細(xì)胞懸液。

2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，加入與脾臟單細(xì)胞懸液等量的分離液（分離液最少不得少于3 mL，總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果）。

3. 小心吸取單細(xì)胞懸液加于分離液液面上，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取單細(xì)胞懸液，然后小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。）

4. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~900g，離心20~30min。（根據(jù)脾臟單細(xì)胞懸液的量確定離心條件，單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件可以自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）。

5. 離心后，此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。第一層為稀釋液層；第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層；第三層為透明分離液層；第四層為紅細(xì)胞層。

6. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞至另一潔凈的 15mL離心管中，向離心管中加入10ml細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞，250g，離心10min。

7. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心 10min。

8. 重復(fù)步驟7

9. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。

骨髓單細(xì)胞懸液的制備方法（僅供參考）

小動(dòng)物骨髓的采集：

1. 處死動(dòng)物，無(wú)菌提取股骨和脛骨，剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔（注意盡可能少的剪走骨髓腔）。

2. 取1ml的無(wú)菌注射器，吸取少量的含有10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的稀釋液或者是含有血清的培養(yǎng)基，沖洗骨髓腔以獲得骨髓。

3. 最終制備成2×108–1×109 /ml 的單細(xì)胞懸液備用。大動(dòng)物骨髓的采集：大動(dòng)物骨髓的采集可采取活體穿刺方法：先將動(dòng)物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚，然后估計(jì)好皮膚到骨髓的距離，把骨髓穿刺針的長(zhǎng)度固定好。操作人員用左手把穿刺點(diǎn)周圍的皮膚繃緊，右手將穿刺針鉆入，當(dāng)穿刺針進(jìn)入骨髓腔時(shí)常有落空感。連接注射器緩慢抽吸骨髓組織，當(dāng)注射器內(nèi)抽到少許骨髓時(shí)即停止抽吸。用含10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的稀釋液調(diào)整細(xì)胞濃度為2×10⁸-1×10⁹ /mL的單細(xì)胞懸液備用。

相關(guān)文獻(xiàn)：

[1] Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.

[2] Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.

[3] Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.

[4] Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.

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